科技成果

一、PCR-ARMS

ARMS (amplification refractory mutation system): 通過設計與突變DNA 互補引物,唯有與突變DNA 完互補的引物才可延伸并得到PCR 擴增產物。

技術特點:

● 靈敏度高(靈敏度達0.1% ,是傳統測序方法200 倍)

● 操作簡單(熒光定量PCR,1.5-2h)

● 可重復性強

二、Sanger 測序

即雙脫氧鏈終止法(Chain Termination Method),是DNA 序列分析的經典方法,可直接讀取DNA 的序列,因而可檢測已知和未知突變,因此被認為是基因分型的金標準。微衛星不穩定(MSI)及染色體1p19q 缺失檢測也可采用該技術。

 技術特點:

PCR 產物經克隆后測序或直接對PCR 產物進行測序

● 基因檢測的金標準

● 靈敏性:20%

三、熒光定量PCRReal-Time PCR

可以實現對RNA 的絕對和相對定量分析,是RNA 分析中較強大、敏感的定量分析技術。常用于單個或多個基因的表達分析及拷貝數變化檢測,適用于擴增基因中短的(小于300bp)外顯子片段。

技術特點:

● 準確

● 可重復性好

● 操作簡單

四、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH

是一種重要的非放射性原位雜交技術。基本原理是: 如果被檢測的染色體或DNA 維切片上的靶DNA 與所用的核酸探針是同源互補的,二者經變性- 退火- 復性,即可形成靶DNA 與核酸探針的雜交體。可用于對DNA/RNA 進行定性、定量或相對定位分析。

技術特點:

● 高度的敏感性和可靠性

● 安全、快速

● 能同時顯示多種顏色

五、循環腫瘤細胞(Circulationg Tumor Cell, CTC)檢測(CellSearchTM 系統)

結合免疫磁珠、流式分析和免疫發光技術而建立的快速、靈敏的CTC(上皮來源)富集和定量檢測技術。也是目前唯一通過FDA CFDA 批準的可用于多種癌癥預后判斷的

CTC 檢測技術。

技術特點:

● 標準化,快速、靈敏

● 半自動,減少人為操作誤差

● 重復性好

六、新一代測序(Next Generation Sequencing, NGS

大規模平行測序技術,一次對幾十萬到幾百萬條DNA 分子進行序列測定,以能一次并行對幾十萬到幾百萬DNA 分子進行序列測定和一般讀長較短等為標志。主要平臺包括Illumina 公司 Hiseq/Miseq 系統及Life Technologies 公司Ion PGM/Proton 系統。

技術特點:

● 開放性技術,可檢測所有已知和未知的基因變異

● 高通量,一次檢測獲得大量數據

● 可進行深度測序,靈敏性超高

七、甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR, MS-PCR)

該方法先用重亞硫酸鹽處理DNA,隨后行引物特異性的PCR。其設計兩對引物,分別與重亞硫酸鹽處理后的序列互補配對,即一對結合處理后的甲基化DNA 鏈,另一對結合處理后的非甲基化DNA 鏈。檢測MS-PCR 擴增產物,如果用針對處理后甲基化DNA 鏈的引物能擴增出片段,則說明該被檢測的位點存在甲基化;反之亦然。

該方法靈敏度高,目前應用廣泛。

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